Protocole de microscopie : réaliser une empreinte des stomates d’une feuille

Observation microscopique — comparer les stomates de feuilles selon une question définie.

Les stomates sont des pores entourés de cellules de garde; ils participent aux échanges de CO₂, d’oxygène et de vapeur d’eau. Une empreinte de la surface foliaire permet de les observer sans couper de tissu pour une lame permanente.

Feuille → empreinte de surface → ruban adhésif sur lame → microscope → comptage

Schéma de préparation d’une empreinte stomatique.

Matériel

Feuilles fraîches d’une même espèce, vernis à ongles transparent, ruban adhésif transparent, lames propres, microscope optique, marqueur et fiche de relevé. Choisir des feuilles comparables; noter l’espèce, l’exposition et l’emplacement.

Étapes

1. Déposer une couche mince de vernis sur une petite zone de la face inférieure de la feuille. Travailler avec ventilation, loin de toute flamme; le vernis et ses solvants sont inflammables.
2. Laisser sécher complètement quelques minutes.
3. Poser un morceau de ruban transparent sur la zone sèche puis le décoller délicatement : le film porte l’empreinte de l’épiderme.
4. Fixer le ruban sur une lame propre et inscrire un identifiant.
5. Observer à faible grossissement, puis augmenter jusqu’à distinguer les pores. Compter dans au moins trois champs de vision non chevauchants par lame.
6. Répéter sur plusieurs feuilles par condition; calculer une moyenne par feuille avant de comparer les groupes.

Éviter de traiter plusieurs champs d’une même feuille comme des échantillons indépendants. Pour estimer une densité par surface, calibrer le champ avec un micromètre de platine et consigner le grossissement.

Sécurité : ventilation, supervision adulte, éloignement des sources d’ignition, aucune application du vernis sur la peau et lavage des mains.

Source pédagogique : Ecological Society of America, Teaching Issues and Experiments in Ecology.